當前mRNA-LNP新冠疫苗的(de)一(yī)個缺點是它們必須在（超）低(dī)溫下儲存，了解這些疫苗不穩性的(de)根本有(yǒu)助于合理(lǐ)提高(gāo)mRNA-LNP産品的(de)穩定性，從而降低(dī)對儲存溫度的(de)要求。

一(yī)篇發表于International Journal of Pharmaceutics2021年(nián)5月刊的(de)題為(wèi)“mRNA-lipid nanoparticle COVID-19 vaccines: Structure and stability”的(de)文章(zhāng)對這一(yī)話題的(de)關鍵要素進行(xíng)了分析讨論。這篇綜述讨論了mRNA-LNP可(kě)能的(de)內(nèi)部結構、影響mRNA-LNP穩定性的(de)因素以及優化mRNA-LNP産品穩定性的(de)策略。下文将截取其中部分內(nèi)容。

導緻mRNA疫苗體外不穩定的(de)因素
對mRNA-LNP結構的(de)分析表明，mRNA、可(kě)電離(lí)的(de)陽離(lí)子(zǐ)脂質和(hé)水存在于LNP核心中，中性輔助脂質主要位于包裹的(de)外壁。mRNA水解是mRNA-LNP不穩定的(de)主要因素。

為(wèi)了提高(gāo)mRNA-LNP疫苗的(de)穩定性，首先，應優化mRNA的(de)核苷酸組成。其次，更好地(dì)了解mRNA在LNP核心中所處的(de)環境可(kě)能有(yǒu)助于合理(lǐ)調整LNP結構以保持mRNA的(de)完整性。此外，幹燥技術如(rú)凍幹，可(kě)能是仍有(yǒu)待探索的(de)可(kě)行(xíng)途徑。

mRNA體外穩定性的(de)分析方法

文獻中表示，下列分析評價方法彙總表來自(zì)Poveda等人的(de)綜述。

其中部分檢測方法旨在直接檢測裸露的(de)mRNA結構，因此對于這些穩定性檢測方法，包裝在遞送系統中的(de)mRNA疫苗需先從LNP中釋放出mRNA，其釋放程度需控制以降低(dī)潛在的(de)包裝影響。

凝膠電泳：可(kě)提供mRNA大小和(hé)完整性的(de)信息。目前已有(yǒu)商(shāng)用電泳設備用于mRNA的(de)高(gāo)通量分析。若檢測到mRNA長(cháng)度處的(de)條帶強度降低(dī)、條帶變寬或者出現新的(de)條帶，則提示mRNA鏈變短(duǎn)，可(kě)能存在降解并發生鏈斷裂。

熒光相關光譜（FCS）：可(kě)用于檢測mRNA大小的(de)變化，主要原理(lǐ)是通過熒光标記的(de)mRNA 的(de)布朗運動來計算分子(zǐ)量。然而，這種技術需要熒光标記，與凝膠電泳相比準确度并不一(yī)定更高(gāo)，并且隻能檢測到包括分子(zǐ)量發生顯著變化的(de)mRNA 降解，例如(rú)鏈斷裂等。

高(gāo)效液相色譜儀（HPLC）：各類高(gāo)效液相色譜儀中，已有(yǒu)一(yī)些專利和(hé)文獻證實RP-HPLC、SE-HPLC、IP-HPLC 和(hé) IEX-HPLC 方法能夠成功應用于大分子(zǐ)mRNA純度和(hé)穩定性的(de)分析。其中一(yī)些技術也可(kě)用于mRNA 制備純化。

IEX-HPLC可(kě)用于測量遊離(lí)和(hé)LNP 包封的(de) mRNA。上表中提到的(de)熒光染料（RiboGreen）技術可(kě)以建立相同參數的(de)正交技術，然而使用相同的(de)mRNA-LNP樣品卻測定出了不同的(de)含量結果；與RiboGreen數據相比，IEX-HPLC 結果與體內(nèi)數據的(de)相關性更好。這說明即使是像 RiboGreen檢測這樣的(de)成熟技術，也應該根據具體情況進行(xíng)詳細驗證。

RT-qPCR：可(kě)用于分析mRNA降解。可(kě)測定能轉錄成完整目标cDNA的(de)mRNA 總量，這表明所有(yǒu)影響這個過程的(de)因素都可(kě)以間接定量檢測。RT-qPCR技術的(de)另一(yī)個優點是能定量檢測影響轉錄的(de)所有(yǒu)類型的(de)降解，而之前讨論的(de)其它技術隻能檢測mRNA 的(de)大小。

然而，RT-qPCR 技術也有(yǒu)一(yī)定的(de)局限性，由于所用酶存在錯誤率，導緻結果有(yǒu)時不太可(kě)靠。而且RT-qPCR 技術這目前沒有(yǒu)被廣泛使用，并且無法區分不同類型的(de)降解。

熒光信号測量：使用編碼熒光蛋白的(de)mRNA，可(kě)以通過測量熒光信号間接确定mRNA的(de)完整性，該方法依賴于體外實驗中mRNA在細胞內(nèi)的(de)表達。這種方法有(yǒu)助于為(wèi)生物活性 mRNA-LNP 設計和(hé)處方篩選研究提供指導。

酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)/蛋白質印迹技術（WB）：可(kě)用于确定編碼非熒光抗原的(de)mRNA 的(de)翻譯功效。其優點在于，它給出了制劑的(de)整體完整性和(hé)可(kě)能影響 mRNA 轉錄的(de)所有(yǒu)因素的(de)總和(hé)。其局限性在于，檢測結果精确性較低(dī)，無法明确mRNA破壞的(de)類型，且時間成本較高(gāo)。

本文來源自(zì)：醫麥克微信公衆号，本文僅作信息交流之目的(de)，如(rú)侵權請聯系删除。