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總RNA/mRNA m6A/ac4C定量檢測(比色法)
發布者:小編發布時間:2022-02-07 17:27

N6-甲基腺嘌呤(m6A)是真核生物RNA分子(zǐ)中最常見及豐度最高(gāo)的(de)修飾方式,m6A占所有(yǒu)RNA堿基修飾的(de)比例超過80%,而且在不同的(de)物種中存在。m6A主要分布在mRNA中,同時也存在于非編碼RNA中。mRNA轉錄本中的(de)m6A相對豐度已經被證實能夠影響RNA代謝過程,如(rú)剪切、出核轉運、翻譯能力和(hé)穩定性、RNA轉錄等。異常的(de)m6A甲基化水平受到m6A RNA甲基化酶和(hé)去(qù)甲基化酶的(de)影響,從而導緻RNA的(de)異常功能及疾病的(de)發生。因此,RNA中動态可(kě)逆的(de)m6A化學(xué)修飾能夠作為(wèi)新的(de)表觀遺傳學(xué)标志物,具有(yǒu)重要的(de)生物學(xué)作用。認識RNA轉錄本中m6A甲基化水平和(hé)分布能夠有(yǒu)利于疾病的(de)診斷和(hé)治療。


繼m6A甲基化修飾之後,2018年(nián)11月15日,美國(guó)國(guó)立衛生研究院(NIH)的(de)Shalini Oberdoerffer研究組在Cell雜志在線發表題為(wèi):Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency的(de)研究論文,該論文揭示N4-乙酰胞苷(ac4C)由乙酰轉移酶NAT10催化的(de)mRNA修飾,證明mRNA乙酰化在體外和(hé)體內(nèi)增強底物翻譯。本檢測采用本公司自(zì)研的(de) m6A/Ac4C RNA甲基化定量檢測試劑盒,通過比色的(de)方法定量總RNA中m6A/Ac4C 的(de)甲基化或乙酰化程度,适用于哺乳動物、植物、真菌、細菌和(hé)病毒等物種。


檢測原理(lǐ)是在特定的(de)結合緩沖液中,将待檢測的(de)total RNA/mRNA或者标準品結合到微孔闆表面,然後依次加入特異性的(de)m6A/Ac4C捕獲抗體、檢測抗體和(hé)顯色試劑,最終顯示的(de)顔色深淺與樣品中m6A/Ac4C的(de)濃度呈正比,利用酶标儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過标準曲線即可(kě)計算樣品中m6A/Ac4C的(de)絕對含量,同時通過total RNA總量校正可(kě)對不同樣本中m6A/Ac4C含量進行(xíng)比較。


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【實驗服務流程】


總RNA/mRNA m6A/Ac4C定量檢測(比色法)(圖2)


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