君禮生物提供高(gāo)得率和(hé)高(gāo)性價比的(de) mRNA 和(hé)長(cháng)鏈RNA（多個堿基）的(de)定制合成。在微克到毫克的(de)級别上，開展廣泛的(de)mRNA修飾服務。mRNA 可(kě)從客戶提供的(de) DNA 模闆生成；或者我們可(kě)以從零開始， 提供完整的(de)mRNA體外合成。我們為(wèi)所有(yǒu)的(de)标準 mRNA 片段進行(xíng) Cap0和(hé)Cap1加帽或修飾核苷酸的(de)處理(lǐ)。
有(yǒu)關訂購和(hé)更多信息，請下載我們的(de)客戶mRNA定制合成問卷（見底部）并通過電子(zǐ)郵件發送至 (service@genelily.com)。我們将很快給您答複并提供報價。
1、mRNA體外轉錄合成（IVT, in vitro transcription）
為(wèi)了mRNA能最終有(yǒu)效地(dì)在體外翻譯， 需要在體外轉錄合成mRNA時，摻入5’端的(de)m7G加帽結構和(hé)3’端的(de)多聚腺苷酸[poly(A)尾]結構。加帽的(de)過程，是通過T7 RNA 聚合酶共轉錄，在mRNA分子(zǐ)5’端摻入諸如(rú)Cap0/Cap1。 加尾的(de)過程，是用Poly(A)聚合酶在mRNA分子(zǐ)3’端，加上poly(A)尾， 再用DNase酶消化DNA模闆。5-甲基-胞苷(5-Methyl-CTP), 假尿苷(Pseudo/ ψ-UTP)和(hé)其他修飾核苷酸也可(kě)摻入mRNA, 來降低(dī)免疫原性和(hé)加強穩定性。合成後的(de)mRNA适用于細胞轉染、微注射、體外翻譯和(hé)RNA疫苗等。
定制合成 的(de)mRNA 擁有(yǒu)廣泛的(de)應用：
--用于基因組編輯的(de)mRNA，比如(rú)Zinc-finger Nuclease mRNA，TALEN mRNA，Cas9 mRNA和(hé)Recombinase mRNA等。
--報告基因的(de)mRNA，比如(rú)EGFP mRNA和(hé) Luc mRNA, 用于熒光顯微鏡、流細胞測量和(hé)生物發光成像等。
--重組mRNA, 用于non-integrating generation of iPSC。
2、mRNA純化:
由T7 RNA聚合酶在體外轉錄合成的(de)mRNA，可(kě)能含有(yǒu)各種污染物：比如(rú)未反應完全的(de)小分子(zǐ)底物、反應所需的(de)蛋白酶，以及反應中産生的(de)非特異性産物，如(rú)過短(duǎn)或過長(cháng)或未完全加帽的(de)mRNA等。 某些RNA序列甚至會誘導高(gāo)水平的(de)免疫原性。君禮生物提供高(gāo)效的(de)純化技術，可(kě)去(qù)除相關污染物，從而提高(gāo)下遊應用的(de)處理(lǐ)效率。
矽膠膜純化柱（Silica-gel Membrane Spin Column）
它是一(yī)種用于快速核酸純化的(de)固相萃取技術。mRNA可(kě)以在特定條件下，結合到矽凝膠膜的(de)固相，并在水中或TE (pH 7)中進行(xíng)後續洗滌和(hé)洗脫步驟。這種方法清除了大多數蛋白質、DNA和(hé)NTPs。
HPLC純化法（ÄKTA avant系統）：
mRNA的(de)純化，可(kě)以通過ÄKTA avant系統，使用alkylated non-porous polystyrene-divinylbenzene copolymer microspheres和(hé)優化的(de)緩沖體系，然後進行(xíng)mRNA分析和(hé)mRNA分離(lí)。
HPLC 純化法可(kě)以從體外合成和(hé)化學(xué)修飾後的(de)mRNA 中，去(qù)除雙鏈DNA和(hé)其他污染物，使 mRNA 具有(yǒu)更高(gāo)水平的(de)翻譯，減少免疫原性或 RNA sensor激活。
我們所有(yǒu)的(de) mRNA 産品都提供：
将mCAP/ARCA/EZ Cap摻入到轉錄合成的(de)mRNA片段中，以提高(gāo)翻譯效率。-通過加入經過修飾的(de)核苷酸（5mCTP, ψUTP）和(hé)poly（A）尾，減少宿主細胞免疫反應并增強穩定性。-在合成mRNA過程中，加入DNase酶，降解DNA模闆。-用磷酸酶去(qù)除RNA末端的(de)5'三磷酸鹽(5’ triphosphates)，進一(yī)步減少哺乳動物細胞的(de)先天免疫反應。-采用強大的(de)純化系統，提供高(gāo)産量的(de) mRNA來适應大多數下遊應用。
産品驗證：
【實驗服務流程】
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