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ac4C Rabbit pAb
發布者:小編發布時間:2022-01-21 10:33

ac4C Rabbit pAb(圖1)


産品信息



規格 100μg/支
貨号 Gab-202203
反應物種 Human, Mouse, Rat, Other (Wide Range)
産品應用 DB
推薦稀釋比 DB 1:500 - 1:2000
存儲緩沖液 Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles.
Buffer: PBS with 0.02% sodium azide,50% glycerol,pH7.3.
純化方式 Affinity purification


抗原信息



免疫原 Chemical compounds corresponding to N4-acetylcytidine
序列 Email for sequence


靶點背景信息



RRID AB_2862441


實驗步驟


Dot Blot檢測标準操作流程.

一(yī)、實驗儀器試劑和(hé)耗材

  • (1)Blocking Buffer(RK05742)
  • (2)Antibody Dilution Buffer(RK05743)
  • (3)TBST Buffer(RM00013)
  • (4)HRP 偶聯二抗(AS014,AS003)
  • (5)SignalFire™ ECL Reagent(RM00020/RM00021)
  • (6)Nitrocellulose membrane (0.45μm)(RM00017)

二、實驗步驟

1、膜的(de)準備

Dot Blot檢測采用NC膜,取NC膜裁成6.5cm寬長(cháng)條,并在其上畫長(cháng)寬為(wèi)1cm×1cm正方形小格(在膜上面的(de)藍色紙上畫,畫格時膜(白色)與藍色紙必須完全重疊,讓藍色紙上的(de)正方形小格能在膜上留下正确的(de)劃痕)。

2、多肽稀釋

将不同濃度的(de)多肽稀釋為(wèi)成50ng/ul(稀釋為(wèi)需要的(de)濃度即可(kě))。

3、多肽包被

揭開膜上面的(de)藍色保護紙,用移液器吸取50ng/μL多肽稀釋液2ul點在膜上1cm×1cm正方形小格中心,即多肽包被量為(wèi)100ng(包被量根據需求調整)。點樣完成後,将NC膜放入37℃烘箱中30min。

4、封閉

把膜放入相應的(de)大小的(de)抗體孵育容器中,加入适量Blocking Buffer室溫封閉1h。

5、一(yī)抗孵育

封閉結束10min前,用Antibody Dilution Buffer稀釋一(yī)抗備用。封閉結束後去(qù)除封閉液,加入稀釋好的(de)一(yī)抗工作液,室溫2h或4℃過夜。

6、洗滌

去(qù)除一(yī)抗工作液,加入适量TBST Buffer洗雜4次,5min/次。

7、二抗孵育

洗雜結束前10min,用Antibody Dilution Buffer稀釋二抗備用。去(qù)除TBST Buffer,加入稀釋好的(de)二抗工作液,室溫1h。

8、洗滌

去(qù)除二抗工作液,加入适量TBST Buffer洗雜4次,5min/次。

9、曝光
  • a. 根據膜的(de)大小,按1cm*1cm的(de)膜使用 20ul工作液,按比例吸取等體積的(de) SolutionⅠ和(hé) SolutionⅡ混勻,配制成發光檢測工作液。
  • b. 用平頭鑷子(zǐ)将膜取出,膜的(de)下緣輕輕接觸吸水紙,去(qù)除膜上多餘的(de)液體。用移液器将工作液加到轉印膜上,使其均有(yǒu)覆蓋,室溫孵育 1-2min,此步驟可(kě)在潔淨保鮮膜上或塑料盒中完成。
  • c. 壓片檢測:将膜固定于片夾內(nèi)。暗室內(nèi)壓片 1 分鍾,立即顯影定影,根據結果再調整壓片時間。或直接分别壓片 30 秒、1、3、 5 分鍾,然後一(yī)起顯影定影觀察結果。
  • d. 熒光成像儀檢測:将膜放置到熒光成像儀內(nèi),參考儀器說明書進行(xíng)檢測。


說明書下載:N4-acetylcytidine (ac4C Rabbit pAb).pdf    

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