衆所周知，在真核生物中，m6A(N6-methyladenosine)是 RNA 分子(zǐ)中最常見的(de)和(hé)豐富存在的(de)。這種修飾是由 m6A 催化甲基轉移酶複雜METTL3 和(hé)最近發的(de)m6ARNA 去(qù)甲基轉移酶如(rú)FTO 和(hé)  ALKBH5，這種 m6ARNA 去(qù)甲基是以 α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和(hé) Fe2+-方式進行(xíng)的(de)。 結果表明， 在許多生物過程中，如(rú)從生命發展 和(hé)代謝生育，METTL3，FTO 和(hé) ALKBH5 扮演着重要角色。超過 80% 的(de) m6A 是以 RNA 甲基化的(de)形式存在于不同的(de)物種。 m6A 主要分布在 mRNA 和(hé)也發生在非編碼 RNA(ncRNA)如(rú) tRNA，rRNA 和(hé)  snRNA。     

相對豐富的(de)m6A在 mRNA 轉錄時已經表明影響核糖核酸代謝過程，如(rú)拼接，核出口，翻譯能力和(hé)穩定性，RNA 轉錄。異常甲基化水平 的(de)m6A 誘導缺陷甲基化酶和(hé)m6ARNA 去(qù)甲基酶可(kě)能導緻RNA 功能障礙的(de)和(hé)疾病發生。例如(rú)，異常低(dī)水平在正常 m6A 目标由于增加患者  FTO 活動、FTO 基因突變，通過迄今還未通路，導緻了肥胖和(hé)相關疾病的(de)發作。動态和(hé)可(kě)逆化學(xué) m6A 修飾，在 RNA中也可(kě)以作為(wèi)一(yī)種 新穎的(de)表觀遺傳标記的(de)生物學(xué)，意義深遠可(kě)以預見。因此，更多的(de)有(yǒu)用的(de)信息，更好理(lǐ)解 m6ARNA 甲基化水平和(hé)分布對 RNA轉錄、 診斷和(hé)治療疾病非常有(yǒu)益。

該産品中，總RNA必将結合在微孔闆上，使用一(yī)種高(gāo)特異性的(de)RNA溶液方案。使用特異性較強的(de)捕獲抗體和(hé)檢測抗體來分析m6A。檢測産生的(de)增強信号，然後通過讀取在微型闆分光光度計激發波波長(cháng)為(wèi)530 nm處 和(hé)發射波在590nm處熒光來進行(xíng)定量分析。m6A的(de)數量與測量的(de)熒光信号是成正比的(de)。在這個試劑盒中包括陽性和(hé)陰性對照。繪制标準曲線  (範圍:0.02到1 ng的(de)m6A)或單點對照的(de)m6 A可(kě)以用作陽性對照。因為(wèi)m6A的(de)含量， 在不同的(de)組織，正常和(hé)病變的(de)部位，或在處理(lǐ)過以及未處理(lǐ)的(de)條件 下，我們建議運行(xíng)2份樣品，以确保信号生成的(de)可(kě)信心性。 這套解決方案将允許研究人員選擇定量一(yī)個絕對數量的(de)m6A或确定相對m6ARNA甲基化狀态的(de)兩個不同的(de)RNA樣品。該款産品擁有(yǒu)一(yī)套完整 的(de)優化緩沖液和(hé)試劑體系，可(kě)以采用熒光法來定量總RNA中的(de) m6A(N6- methyadenosine)。對于總RNA(從哺乳動物，各種組織或細胞樣本如(rú)像培 養瓶和(hé)培養皿培養的(de)細胞， 新鮮和(hé)冷凍的(de)組織，石蠟包埋組織，血液， 體液，植物，真菌，細菌和(hé)病毒等任何樣本中提取的(de)) 中m6A 直接定量檢測甲基化狀态是非常理(lǐ)想的(de)。

試劑盒組成：

*在使用之前将溶液離(lí)心至管底。

實驗過程：

産品優點：

● 極速：檢測方便快速。整個操作步驟僅需 3 小時 45 分鍾。

● 高(gāo)敏：檢測的(de)最低(dī)下限為(wèi) 5 pg 的(de) m6 A 。

● 特異性好：獨特的(de)結合液容許 >70 nts 的(de)RNA 緊緊的(de)結合在孔上，可(kě)以定量檢測來自(zì)mRNA和(hé)ncRNA如(rú)tRNA，rRNA 和(hé)snRNA。

● 專一(yī)性強：優化的(de)抗體和(hé)增強劑溶液可(kě)以特異的(de)定量檢測 m6 A，對于特定片段腺苷濃度範圍的(de)未甲基化樣本RNA 不會産生交叉反應。

● 靈活性好：96 孔可(kě)拆卸闆模式使研究人員能根據自(zì)己需要選擇手工或是高(gāo)通量模式分析。

● 可(kě)信：操作簡便、可(kě)信、分析 條件始終如(rú)一(yī)。

*本品僅供科(kē)研使用，請勿用于臨床與診斷。

說明書下載：m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（熒光法）.pdf