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外泌體服務
發布者:admin發布時間:2022-04-02 18:03
簡介

外泌體,英文 Exosome,是活細胞經過 '內(nèi)吞 - 融合 - 外排' 等一(yī)系列調控過程而形成的(de)膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體 (也稱為(wèi)多囊泡體),直徑約為(wèi) 30-150nm,密度在 1.13-1.21g/m1,天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液和(hé)母乳(圖1)。 近年(nián)來,外泌體悄然成為(wèi)生物醫學(xué)的(de)熱門研究領域。


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圖1、體液來源的(de)細胞外膜泡概覽(J Extracell Vesicles. 2015 May 14;4:27066.)


Exosome內(nèi)含有(yǒu)與細胞來源相關的(de)蛋白質rRNA和(hé)microRNA,Exosome可(kě)通過細胞膜受體直接激活受體細胞,也可(kě)運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細胞器進入受體細胞,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎症反應、血管生成、凋亡、凝血和(hé)廢物處理(lǐ)等生理(lǐ)過程發揮關鍵作用,不同細胞來源的(de)exosome所含有(yǒu)的(de)RNA和(hé)蛋白成分不盡相同,可(kě)作為(wèi)多種疾病的(de)早期診斷标記物,也能作為(wèi)靶向藥物的(de)載體進行(xíng)疾病治療。
miRNA是一(yī)類22nt左右大小的(de)非編碼分子(zǐ), 它可(kě)以通過外泌體從一(yī)個地(dì)方轉運到另外一(yī)個地(dì)方行(xíng)使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,可(kě)以發現外泌體中miRNA特異性功能。


研究現狀


1、外泌體研究的(de)主要應用
外泌體的(de)功能取決于其所來源的(de)細胞類型,其可(kě)參與到機(jī)體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。有(yǒu)研究表明腫瘤來源的(de)外泌體參與到腫瘤細胞與基底細胞的(de)遺傳信息的(de)交換,從而導緻大量新生血管的(de)生成,促進了腫瘤的(de)生長(cháng)與侵襲。
腫瘤:

1)腫瘤轉移。來自(zì)白血病幹細胞的(de)外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的(de)增殖、遷移和(hé)抑制細胞凋亡;

2)治療靶标。利用外泌體遞送小幹擾RNA來沉默KRAS G12D,從而特異性高(gāo)效靶向至胰腺癌細胞,以顯著降低(dī)RAS活化、癌細胞增殖和(hé)轉移過程。
免疫:細胞将含有(yǒu)蛋白質和(hé)miRNA的(de)外泌體釋放到細胞外,并可(kě)轉移到其他代謝器官或免疫內(nèi)皮細胞,有(yǒu)利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。

心血管:外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內(nèi)皮細胞導緻了內(nèi)皮細胞的(de)損傷促進動脈粥樣硬化
分子(zǐ)标記:

1)疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、病毒性肝炎、藥物性肝損傷和(hé)肝細胞癌中發現循環EVs的(de)水平上升。

2)預後标志。


外泌體整體服務方案(圖2) 
圖2、外泌體的(de)多元應用(Trends in Molecular Medicine, 2017; 23 (7): 636)

君禮生物經過多年(nián)沉澱,在外泌體的(de)分離(lí)與鑒定、生物标志物的(de)發現和(hé)外泌體功能研究等領域具有(yǒu)大量的(de)經驗,目前能夠提供全套上述服務(簡介如(rú)下圖),歡迎廣大研究人員與我們共同推進外泌體研究的(de)發展。

服務內(nèi)容(包括但不限于): 

外泌體的(de)分離(lí)與鑒定;

外泌體功能研究;

外泌體提取服務;

外泌體電鏡檢測服務、粒徑檢測服務;

外泌體基因、蛋白檢測分析服務:1) 外泌體microRNA檢測分析; 2) 外泌體lncRNA檢測分析; 3) 外泌體蛋白表達檢測分析;

外泌體NSG測序服務;


——生物标志物發現:


外泌體整體服務方案(圖3)

——外泌體功能研究:

外泌體整體服務方案(圖4)

部分實驗結果:

外泌體整體服務方案(圖5)


研究實例:
胃癌腫瘤細胞來源的(de)exosome對CD8+T細胞的(de)影響:

胃癌腫瘤組織與不同分化程度的(de)人源胃癌細胞系MKN45(低(dī)分化)、SGC7901(中低(dī)分化)、MKN28(高(gāo)分化)來源的(de)exosome對CD8+T細胞的(de)影響 :

a) 将不同分期的(de)腫瘤組織及癌旁組織中分離(lí)腫瘤細胞以及不同分化程度的(de)人源胃癌細胞系MKN45(低(dī)分化)、SGC7901(中低(dī)分化)、MKN28(高(gāo)分化)經體外擴增培養後,以及細胞後續進行(xíng)Rab27a/b基因敲低(dī)後,收集獲得exosome。
b) exosome鑒定:


ELISA(CD63、CD9、CD81)及western blot(CD63、TSG101、Alix、LAMP-2、b-actin、Hsp90、GRP94、EEA1、Cytochrome C)方法檢測exosome的(de)表達水平。

外泌體檢測服務(圖1)


電鏡觀察分離(lí)的(de)外泌體形态

外泌體檢測服務(圖2)

納米顆粒檢測


外泌體檢測服務(圖3)


【實驗服務流程】


總RNA/mRNA m6A/Ac4C定量檢測(比色法)(圖2)


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